《GB 4789.12-2025產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》解讀
發布時間：2025-11-12 瀏覽次數：369
微生物學檢驗標準的更新是食品安全領域風險控制的關鍵環節。近期我國陸續發布了多項食品安全的新標準，其中包括了《GB4789.12-2025 產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。本標準與 GB4789.30—2016相比，主要變化如下：
— 修改了標準名稱;
— 增加了術語和定義；
— 修改了范圍；
— 增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法；
— 修改了設備和材料、培養基和試劑；
— 修改了檢驗程序、操作步驟、結果與報告及附錄。
修改了標準名稱、范圍，增加“產肉毒毒素梭菌”的術語定義
標準名稱修訂：由《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗》變更為《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗》。
范圍修訂：2016版標準適用于“肉毒梭菌”的檢驗；2025版標準適用于“產肉毒毒素梭菌”的檢驗。
新增術語定義“產肉毒毒素梭菌”：革蘭氏陽性厭氧桿菌，能形成卵圓形芽孢，一般芽孢會大于菌體、位于次端,在適宜培養條件下能產生肉毒毒素的一類細菌的統稱。包含肉毒梭菌(Clostridium botulinum)、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)等。
技術意義：由于近年來發現，除肉毒梭菌外，其他梭菌，如E型丁酸梭菌等也可產生肉毒毒素， 并引發食源性肉毒中毒，因此，名稱修改后標準適用性范圍覆蓋肉毒梭菌、丁酸梭菌等產肉毒毒素梭菌檢驗，更科學更精準。
增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法
變更內容
2025版標準進一步“增加了梭菌實時熒光PCR鑒定方法”，并在普通PCR部分提供了更詳細的基因序列位置信息（GenBank編號）。
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技術意義
根據不同梭菌的全基因組序列，建立了梭菌屬水平、肉毒梭菌和丁酸梭菌種水平鑒定用熒光PCR方法，實現了對“產肉毒毒素梭菌”的精準菌種鑒定。
針對毒素基因分型檢測，可使用環凱肉毒梭菌A/B型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD06P）和肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測試劑盒（KJD07P）。
培養基和試劑的修改
變更內容
新增生理鹽水。
新增哥倫比亞血瓊脂培養基。
修改“10%胰蛋白酶溶液”改為“胰蛋白酶：1：250 或 0.25%。
新增10×TAE緩沖液。
技術意義：哥倫比亞血平板結合卵黃瓊脂，提高了對各類“產肉毒毒素梭菌”的分離成功率，增強了方法的可靠性。
推薦環凱明膠磷酸鹽緩沖液（027143）或其即用成品（C27143D1）、TPGYT培養基基礎（027147）或TPGYT肉湯管（C27147G1）、即用型庖肉培養基（含鐵粉）（C27140G2）、哥倫比亞血平板 （CP0160）、厭氧卵黃瓊脂基礎（027165）+50%卵黃乳液（029250）。
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庖肉培養基（含鐵粉）（C27140G2） | TPGYT肉湯管不含胰酶（C27147G1） | 哥倫比亞血平板（CP0160） |
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厭氧卵黃瓊脂基礎（027165） | + 50%卵黃乳液（029250） | 厭氧培養相關產品 |
檢驗程序與操作步驟的變化
變更內容
流程圖將固態、半固態、液體樣品的肉毒素檢驗方法合并。
調整了皰肉培養基、卵黃瓊脂平板的培養溫度從35℃±1℃調整為36℃±1℃，并將皰肉培養基、TPGYT的培養時間在5d培養后培養基無菌生長應延長培養至10d體現在了流程圖中。
新增哥倫比亞血瓊脂，用于觀察肉毒梭菌的菌落形態。
新標準中革蘭氏染色和PCR毒素編碼基因檢測后再進行肉毒素檢驗和實時熒光PCR，提升檢驗的精確度，將產肉毒素的梭菌精確到梭菌屬和種，不再局限于肉毒梭菌。
技術意義：不同形態的樣品檢測方法合并后，操作方法更為靈活；培養條件36℃±1℃與其他國家標準的微生物培養溫度更為統一。
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結果與報告的
修訂：2016版“肉毒梭菌檢驗結果報告”修訂為2025版“產肉毒毒素梭菌檢驗結果報告”，需報告樣品中未檢出或檢出產某型肉毒毒素的某種梭菌，如：樣品中檢出產E型肉毒毒素的丁酸梭菌。
技術意義：新增報告不僅能確認樣品中是否存在肉毒毒素風險，還能明確產生該毒素的具體菌種和毒素型別，提升溯源價值。
總 結
本次修訂將標準名稱修改為“產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素檢驗”，通過增加培養基和不同瓊脂培養基上的菌落形態描述等，可實現對產肉毒素的肉毒梭菌和丁酸梭菌的有效檢出。
同時，增加了分離菌鑒定用熒光PCR方法，可快速對可疑菌落進行鑒別。通過上述一系列技術內容的修訂，該標準不再僅適用于食品中肉毒梭菌和肉毒毒素檢驗，而是適用于多種產肉毒毒素梭菌和肉毒毒素的檢驗。
該標準可提高食品中產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的檢出能力，為高風險食品中產肉毒毒素梭菌及肉毒毒素的風險監測和評估等風險防控工作提供有力技術支撐。
附錄：GB 4789.12-2025 標準檢驗流程環凱配套產品速查表
