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環凱生物酶底物法檢測系統(含質控樣)
—GB/T5750-2023《 生活飲用水標準檢驗方法》酶底物法
—HJ1001-2018《 水質 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法》
一、相關產品特點
適用性廣/可靠度高
依據GB/T5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》和HJ1001-2018《水質總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法》中的酶底物法檢測培養基要求，環凱生物自主研發了酶底物法專用的MMO-MUG培養基。該培養基通過了對100株包含大腸菌群、大腸埃希氏菌或糞(耐熱)大腸菌群(包括從水樣分離的菌株和標準菌株)的驗證，結果顯示其特異性高,陽性菌株特征明顯，無假陰性情況。培養基的靈敏度高，可精確檢出低至1MPN/100 mL水樣中的大腸菌群和大腸埃希氏菌或糞(耐熱)大腸菌群活菌，并且對水樣中常見的非大腸菌群(包括酶底物假陽性菌株)具有明顯的抑制作用。產品已通過超200份樣品的測試,涵蓋生活飲用水、地表水、地下水、生活污水和工業廢水等多個領域。
為了滿足客戶的方法驗證、培養基適用性驗證、陽性對照和定量檢測等需求，環凱生物推出了可追溯的質控樣。產品結果顯示底物或熒光底物特異性高，通過抑菌劑有效抑制其他異養菌，能夠準確檢測出水樣中的大腸菌群和大腸埃希氏菌或糞(耐熱)大腸菌群活菌。通過顏色或熒光判讀結果,陰陽性區分明顯。
操作簡單/檢驗周期短
只需4步即可完成檢測，平均每分鐘可檢測一份樣品。
檢驗周期只需24小時，無需驗證試驗。
二、產品檢測原理
總大腸菌群、糞大腸菌群、大腸埃希氏菌能產生B-半乳糖苷酶，使培養基中的無色底物鄰硝基苯β-D-吡喃半乳甘糖分解黃色的鄰硝基苯酚，其中大腸埃希氏菌還能同時產生β-葡萄糖醛酸酶，使培養基中的4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸酶分解為-甲基傘形酮，在紫外燈照射下產生熒光。在36±1℃經培養后培養孔變黃的為總大腸菌群；培養孔變黃并伴有熒光的為大腸埃希氏菌；44.5C培養后培養孔變黃的為糞大腸菌群，變黃并有熒光的為大腸埃希氏菌。統計陽性反應出現的數量，對照MPN圖表，分別計算出總大腸菌群，糞大腸菌群，大腸埃希氏菌的濃度值。
酶底物法檢測系統(含質控樣)技術參數
—— 水中大腸菌群檢測酶底物法產品系列(含質控包)技術參數
飲用水、地表水、污水檢測
—— 適用于自來水系統、疾病預防控制中心、進出口檢驗檢疫系統、第三方檢測實驗室、環境監測站、污水處理廠、水文站等系統
符合GB/T5750-2023《生活飲用水標準檢驗方法》酶底物法(MMO-MUG)和HJ1001-2018水質總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定酶底物法》培養基要求
一、定量操作
1、無顏色變化：陰性
2、如果是36±1℃培養24小時：黃色孔格數對照MPN表得到總大腸菌群檢測結果；黃色且熒光的孔格數對照MPN表得到大腸埃希氏菌檢測結果
3、如果是44.5°C培養24小時：黃色孔格數對照MPN表得到耐熱大腸菌群檢測結果
二、定性操作
將100mL水樣加入100mL無菌取樣瓶中，向瓶中加入環凱的MMO-MUG培養基，輕搖瓶子確保培養基完全溶解后，放入培養箱內培養24h。
1、無顏色變化：陰性
2、顏色變黃：總大腸菌群陽性
3、顏色變黃且觀察到熒光(使用366nm紫外燈照射顯黃色的取樣瓶，呈現明顯熒光)：大腸埃希氏菌陽性
三、10管法操作
《GB5750.12-2023》酶底物法中對10管法的操作描述如下：
將100mL水樣加入100mL無菌取樣瓶中，向瓶中加入環凱的MMO-MUG培養基，輕搖瓶子確保培養基完全溶解；
準備10支無菌試管，用無菌吸管從上述水樣瓶中分別吸取10mL水樣至各試管中，放入培養箱中培養24h。
1、如果是36±1℃培養24小時：黃色管數對照MPN表得到總大腸菌群檢測結果；結果讀取：黃色且熒光的管數對照MPN表得到大腸埃希氏菌檢測結果；
2、如果是44.5℃培養24小時：黃色管數對照MPN表得到耐熱大腸菌群檢測結果。請查閱GB5750.12-2023酶底物法10管法MPN表獲取檢測結果。
質量控制體系（質控樣）
—— 請在專業技術人員指導下完成
意義：
● 符合GB27043-2012合格評定能力驗證的通用要求，符合CNAS-CL01-A001-2022對微生物實驗室的要求；
● 用于識別培養基、設備、方法是否準確及評估操作人員的能力和確認其資格；
● 檢測測量方法的有效性。
操作步驟
01、準備1個空的無菌瓶(>300 mL) 和300mL 稀釋液(無菌水或無菌PBS 緩沖液)。
02、將質控樣凍干粉從冰箱中取出，置于室溫10~15分鐘平衡溫度。
03、打開質控凍干粉，加入稀釋液3mL溶解凍干粉，待充分溶解后全部轉移到無菌瓶中。
04、加少量的稀釋液沖洗凍干粉瓶，回收所有質控樣菌懸液到無菌瓶中，將剩余的稀釋液倒入，充分振蕩確保均勻，總體積為300mL。
05、每個質控樣凍干粉的量可做3個平行實驗，將質控樣懸液倒入取樣瓶，每瓶定容到100mL 刻度。
06、將MMO-MUG 培養基倒入每個含質控樣取樣瓶中，混勻。將所有混合液倒入97孔定量盤中并封膜，在36±1°C培養24小時。
07、判讀：黃色孔格為總大腸菌群陽性，黃色且顯熒光為大腸埃希氏菌陽性，對照MPN表定量計數。
